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TUhjnbcbe - 2021/6/11 2:00:00
SinglecellRNA-seqanalysisworkshop

该系列课程由瑞典国家生物信息学基础设施(NBIS)负责设置,为瑞典Phd学生,博士后,研究人员和瑞典学术界的其他工作人员开设的全国性研讨会。

本课程将通过演讲和实战练习涵盖了单细胞转录组(scRNA-seq)数据分析的基本步骤。涵盖的主题包括:

AnoverviewofthecurrentscRNAseqtechnologies(当前常用scRNA-seq技术概述)Basicoverviewofpipelinesforprocessingrawreadsintoexpressionvalues(原始测序数据比对转换为基因表达矩阵的分析流程概述)QualitycontrolofscRNAseqdata(scRNA-seq数据的质量控制)Dimensionalityreductionandclusteringtechniques(数据降维和聚类分析技术)Datanormalization(数据归一化处理)DifferentialgeneexpressionforscRNAseqdata(scRNA-seq数据的差异基因表达分析)Celltypeprediction(细胞类型预测)Trajectoryanalysis(细胞轨迹拟时分析)ComparisonofdifferentanalysispipelinessuchasSeurat,ScranandScanpy(不同分析工具流程的比较,如Seurat,Scran和Scanpy)实战练习

在该实战练习中,我们使用了3种常用的scRNA-seq分析工具流程(Seurat,Scran和Scanpy),分别提供了不同分析工具的简短教程,我们可以任选自己熟悉的工具进行scRNA-seq数据分析。原则上,我们对这三种不同的分析工具执行相同的步骤,但是仍会存在一些细微的差异,因为并非在所有的分析工具中实现了所有不同的方法。

在本实战中,我选用了scRNA-seq数据分析中最常用的Seurat包进行练习演示。

第一节:数据质控实战下载示例数据

在本教程中,我们将使用来自3个covid-19患者和3个健康对照的6个PBMC的10x数据集运行所有的教程,每个样本已被二次采样为个细胞。

#新建数据存放的文件夹mkdir-pdata/raw#firstcheckifthefilesaretherecount=$(ls-ldata/raw/*.h5

grep-v^d

wc-l)echo$count#ifnot4files,fetchthefilesfromgithub.#下载示例数据if(("$count"6));thencddata/rawcurl-O

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